Dithiothreitol(DTT)은 일반적으로 사용되는 환원제이며 새로운 친환경 첨가제라고도 알려져 있습니다.두 개의 메르캅탄 그룹(-SH)을 가진 작은 분자 유기 화합물입니다.환원 특성과 안정성으로 인해 DTT는 생화학 및 분자 생물학 실험에 널리 사용됩니다.
DTT의 주요 역할은 단백질 및 기타 생체 분자의 이황화 결합을 줄이는 것입니다.이황화 결합은 단백질 접힘 및 안정성의 중요한 부분이지만 환원성 SDS-PAGE 분석, 단백질 재조합 및 접힘과 같은 특정 실험 조건에서는 이황화 결합을 두 개의 티올 그룹으로 줄여서 단백질의 공간 구조를 풀어야 합니다. 단백질.DTT는 이황화 결합과 반응하여 이를 메르캅탄 그룹으로 환원함으로써 단백질의 공간 구조를 개방하고 분석 및 조작을 쉽게 만듭니다.
DTT는 효소 활성과 안정성을 보호하는 데에도 사용될 수 있습니다.일부 효소 촉매 반응에서는 산화제에 의해 효소 활성이 감소할 수 있습니다.DTT는 산화제와 반응하여 산화제를 무해한 물질로 환원함으로써 효소의 활성과 안정성을 보호할 수 있습니다.
β-메르캅토에탄올(β-ME)과 같은 전통적인 환원제에 비해 DTT는 더 안전하고 안정적인 환원제로 간주됩니다.수용액에서 안정할 뿐만 아니라 고온, 산-염기 조건에서도 환원성을 유지합니다.
DTT의 사용은 비교적 간단합니다.일반적으로 DTT는 적절한 완충액에 용해된 후 실험 시스템에 추가됩니다.DTT의 최적 농도는 구체적인 실험에 따라 결정되어야 하며 일반적으로 0.1-1mM 범위에서 사용됩니다.농도가 낮을수록 세포 성장에 대한 부작용을 줄일 수 있고 표적 단백질의 과발현으로 인한 세포 독성을 줄일 수 있습니다.농도가 높을수록 과도한 세포 대사 부담을 유발하여 세포 성장 및 발현 효율에 영향을 미칠 수 있습니다.
최적의 농도를 결정하는 방법은 농도별로 IPTG 유도시험을 실시하여 목적 단백질의 발현 정도를 평가하는 것일 수 있다.다양한 IPTG 농도(예: 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM 등)를 사용하여 소규모 배양 테스트를 수행할 수 있으며, 목적 단백질(예: Western)의 발현 수준을 검출하여 다양한 농도에서의 발현 효과를 평가할 수 있습니다. 오점 또는 형광 검출).실험 결과에 따르면 발현 효과가 가장 좋은 농도를 최적 농도로 선정하였다.
또한 관련 문헌이나 다른 실험실의 경험을 참조하여 유사한 실험 조건에서 일반적으로 사용되는 IPTG 농도 범위를 이해한 다음 실험 요구에 따라 최적화하고 조정할 수도 있습니다.
최적의 농도는 다양한 발현 시스템, 표적 단백질, 실험 조건에 따라 달라질 수 있으므로 사례별로 최적화하는 것이 가장 좋습니다.
요약하면, DTT는 단백질 및 기타 생체분자의 이황화 결합을 감소시키고 효소 활성 및 안정성을 보호하는 데 사용할 수 있는 일반적으로 사용되는 환원제입니다.생화학 및 분자 생물학 실험에 널리 사용되었습니다.
게시 시간: 2023년 9월 28일