최적의 농도를 결정하는 방법은 무엇입니까?
유도제 IPTG(이소프로필-베타-d-티오갈락토사이드)의 경우 농도가 높을수록 좋습니다.최적의 농도는 특정 실험 조건과 원하는 유도 효과에 따라 달라집니다.
일반적으로 IPTG의 농도는 0.1~1mM 범위에서 사용된다.농도가 낮을수록 세포 성장에 대한 부작용을 줄일 수 있고 표적 단백질의 과발현으로 인한 세포 독성을 줄일 수 있습니다.농도가 높을수록 과도한 세포 대사 부담을 유발하여 세포 성장 및 발현 효율에 영향을 미칠 수 있습니다.
최적의 농도를 결정하는 방법은 농도별로 IPTG 유도시험을 실시하여 목적 단백질의 발현 정도를 평가하는 것일 수 있다.다양한 IPTG 농도(예: 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM 등)를 사용하여 소규모 배양 테스트를 수행할 수 있으며, 목적 단백질(예: Western)의 발현 수준을 검출하여 다양한 농도에서의 발현 효과를 평가할 수 있습니다. 오점 또는 형광 검출).실험 결과에 따르면 발현 효과가 가장 좋은 농도를 최적 농도로 선정하였다.
또한 관련 문헌이나 다른 실험실의 경험을 참조하여 유사한 실험 조건에서 일반적으로 사용되는 IPTG 농도 범위를 이해한 다음 실험 요구에 따라 최적화하고 조정할 수도 있습니다.
최적의 농도는 다양한 발현 시스템, 표적 단백질, 실험 조건에 따라 달라질 수 있으므로 사례별로 최적화하는 것이 가장 좋습니다.
게시 시간: 2023년 9월 28일